培養基製作為什麼要補水

A. 馬鈴薯培養基的製作過程

(1)稱量和熬煮

按培養基配方逐一稱取去皮土豆。土豆切成小塊放入鍋中，加水1000ml，在加熱器上加熱至沸騰，維持20-30min，用可用2層紗布趁熱在量杯上過濾，濾渣棄取。濾液補充水分到1000ml。

(2)加熱溶解

把濾液放入鍋中，加入葡萄糖20g，瓊脂15～20g(提前搞碎)，然後放在石棉網上，小火加熱，並用玻棒不斷攪拌，以防瓊脂糊底或溢出，待瓊脂完全溶解後，再補充水分至所需量。

(3)分裝

按實訓要求，將配製的培養基分裝入試管或500ml三角瓶內。分裝時可用三角漏斗以免使培養基沾在管口或瓶口上造成污染。

分裝量：固體培養基約為試管高度的1/5，滅菌後製成斜面，分裝入三角瓶內以不超過其容積的一半為宜;半固體培養基以試管高度的1/3為宜，滅菌後垂直待凝。

(4)加棉塞

培養基分裝完畢後，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或試管帽等)，以阻止外界微生物進入培養基內造成污染，並保證有良好的通氣性能。

(5)包紮

加塞後，將全部試管用麻繩或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道線繩或橡皮筋紮好，用記號筆註明培養基名稱、組別、配製日期。

(1)培養基製作為什麼要補水擴展閱讀

防止污染應該注意以下事項：

確認工作細胞庫是否被污染，確認毒種工作種子批是否被污染，確認所用培養基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染，均可用細菌、真菌及支原體無菌試驗來確認並排除。同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。實際生產中，可以從配製好的培養液中取少量加入營養瓊脂於恆溫培養箱內培養，48小時即可觀察有無污染。

其它：高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證，確保滅菌和除菌效果;前者應在投產前及其後的每6個月進行驗證，後者應在每次除菌前、後進行驗證工作(至少應在除菌後進行一次)。

另外，應將有毒區與無毒區嚴格分開，並有各自獨立的空氣凈化系統及孵室，有毒區對無毒區應保持相對負壓，防止病毒對培養細胞(尤其是細胞庫)的污染。

B. 菌袋培養基補水注意啥

在食用菌栽培中,水分起著為菌絲和菇體提供營養的作用,是決定產量高低和快速轉潮的重要因素。大多數品種的培養料適宜含水量為60%-65%,在出菇過程中培養料和空間的水分都逐漸減少,需要及時補充。在對菌袋的培養基補水時應當注意以下幾個要點:
1.補水時機和補水量:香菇等轉色完成、出菇前就要補水,補到培養料含水量65%左右。多數食用菌在第一潮菇採收後,基質營養豐富,基質中水分含量還較高,補水量宜少些;當長過第二潮菇後,基質營養減少,基質中的水分也降低,補水量可多些,菌袋浸水的時間可長些。補水時要先養菌,再補水,補水量控制在原菌袋重量的80%-90%為好。菌絲稀疏、長勢弱、溫度低於5℃或料內發生病蟲害時不宜補水。三潮菇後補水時,可同時補充營養物質,常用尿素、糖、磷酸二氫鉀等。
2.補水時應用清潔干凈的河水或地下水:不宜使用地表的塘水和溝水,防止雜菌和害蟲攜帶入基質中,引發病蟲為害。
3.水溫盡可能與菇棚溫度一致,不要用冰涼的水:原基、菇蕾上不要噴水。最好用噴霧器補水,噴嘴朝上向空間噴霧增濕。
4.補水後:如菇體上有水珠應通風去除,否則會給病菌繁殖造成機會,在菇體上形成病斑。

C. 發酵培養基的要求配製培養基時應注意哪些問題

1. 明確培養基的配製原理。
2. 掌握配製培養基的一般方法和步驟。

學習細菌、放線菌、酵母菌及黴菌四大類微生物培養基的配製。

培養基是人工配製的適合微生物生長繁殖或積累代謝產物的營養基質，用以培養、分離、鑒定、保存各種微生物或積累代謝產物。
各類微生物對營養的要求不盡相同，因而培養基的種類繁多。培養細菌常用牛肉膏蛋白腖培養基，培養放線菌常用高氏I號培養基，培養黴菌常用蔡氏培養基或馬鈴薯培養基，培養酵母菌常用麥芽汁培養基或馬鈴薯葡萄糖培養基。另外還有固體、液體、加富、選擇、鑒別等培養基之分。在這些培養基中，就營養物質而言，一般不外乎碳源、氮源、無機鹽、生長因子及水等幾大類。瓊脂只是固體培養基的支持物，一般不為微生物所利用。它在96℃以上熔化成液體，而在45℃左右開始凝固成固體。在配製培養基時，根據各類微生物的特點，就可以配製出適合不同種類微生物生長發育所需要的培養基。
培養基除了滿足微生物所必需營養物質外，還要求有一定的酸鹼度和滲透壓。黴菌和酵母菌的pH偏酸；細菌、放線菌的pH為微鹼性。所以每次配製培養基時，都要將培養基的pH值調到一定的范圍。
牛肉膏蛋白腖培養基配方
牛肉膏 3.0 g
蛋白腖 10.0g
NaCl 5.0g
水 1000mL
pH 7.4~7.6
高氏I號培養基配方
可溶性澱粉 20g
NaCl 0.5g
KNO3 1g
K2HPO4•3H2O 0.5g
MgSO4•7H2O 0.5g
FeSO4•7H2O 0.01g
瓊脂 15—25g
水 1000mL
pH 7.4~7.6
馬鈴薯培養基配方
馬鈴薯（去皮） 200g
葡萄糖（或蔗糖） 20g
瓊脂 15~25g
水 1000ml
自然pH
察氏培養基配方
蔗糖 30g
NaNO3 2g
K2HPO4 1g
KCl 0.5g
MgSO4•7H2O 0.5g
FeSO4•7H2O 0.01g
瓊脂 15~25g
蒸餾水 1000ml
自然pH
實驗器材
牛肉膏，蛋白腖，NaCl，瓊脂，1mol/LNaOH, 1mol/LHCl，KNO3，K2HPO4•3H2O，MgSO4•7H2O，FeS04•7H2O，馬鈴薯，蔗糖等。
試管，三角瓶，燒杯，量筒，玻棒，培養基分裝器，天平，牛角匙， pH試紙(pH 5.5~9.0)，棉花，牛皮紙，記號筆，麻繩，紗布等。
實驗步驟
1．牛肉膏蛋白腖培養基配製方法
(1) 稱量：按培養基配方比例依次推確地稱取牛肉膏、蛋白腖、NaCL放人燒杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化後倒入燒杯，也可按在稱量紙上，稱量後直接放入水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離，然後立即取出紙片。
蛋白腖很易吸濕，在稱取時動作要迅速。另外，稱葯品時嚴防葯品混雜，一把牛角匙用於一種葯品，或稱取一種葯品後，洗凈，擦乾，再稱取另一葯品。瓶蓋也不要蓋錯。
(2) 溶化：在上述燒杯中先加入少於所需要的水量，用玻棒攪勻，然後，在石棉網上加熱使其溶解。將葯品完全溶解後，補充水到所需的總體積，如果配製固體培養基時，將稱好的瓊脂放入己溶的葯品中，再加熱溶化，最後補足所損失的水分。
在瓊脂溶化過程中，應控制火力，以免培養基因沸騰而溢出容器。同時．需不斷攪拌．以防瓊脂糊底燒焦。配製培養基時，不可用銅或鐵鍋加熱溶化，以免離子進入培養基中，影晌細菌生長。
(3) 調pH
在未調pH前，先用精密pH試紙測量培養基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培養基中逐滴加入1mol/LNaOH,邊加邊攪拌，並隨時用pH試紙測其pH，直至pH達7.6。反之，用mol/LHCL進行調節。
對於有些要求pH較精確的微生物，其pH的調節可用酸度計進行。
pH不要調過頭，以避免回調而影響培養基內各離子的濃度。配製pH低的瓊脂培養基時，若預先調好pH並在高壓蒸氣下滅菌，則瓊脂因水解不能凝固。因此，應將培養基的成分和瓊脂分開滅菌後再混合，或在中性pH條件下滅菌，再調整PH。
(4) 過濾
趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利某些實驗結果的觀察。一般無特殊要求的情況下可以省去（本實驗勿需過濾）。
(5) 分裝
按實驗要求，可將配製的培養基分裝人試管內或三角燒瓶內。
1) 液體分裝：分裝高度以試管高度的l／4左右為宜。分裝三角瓶的量則根據需要而定，一般以不超過三角瓶容積的一半為宜，如果是用於振盪培養用，則根據通氣量的要求酌情減少；有的液體培養基在滅菌後，需要補加一定量的其他無菌成分，如抗生素等，則裝量一定要准確。
2) 固體分裝：分裝試管，其裝量不超過管高的1/5，滅菌後製成斜面。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。
3) 半固體分裝：試管一般以試管高度的1/3為宜，滅菌後垂直待凝。

圖1-1 培養基的分裝
A 漏斗分裝裝置 ；B 自動分裝裝置
1 鐵架 ；2 漏斗 ；3孔膠管 ；4彈簧夾 ；5玻璃 ；6流速調節 ；7 裝量調節 ；8開關
分裝過程中，注意不要使培養基沾在管(瓶)口上，以免沾污棉塞而引起污染。
(6) 加塞

圖1-2 棉塞的製作
培養基分裝完畢後，在試管口或三角烷瓶口上塞上棉塞（或泡沫塑料塞及試管帽等），棉塞的作用有二：一方面阻止外界微生物進入培養基，防止由此而引起的污染；另一方面保證有良好的通氣性能，使培養在裡面的微生物能夠從外界源源不斷地獲得新鮮無菌空氣。因此棉塞質量的好壞對實驗的結果有著很大的影響。一隻好的棉塞，外形應象一隻蘑菇，大小、松緊都應適當。加塞時的棉塞的總長度的3/5應在口內，2/5在口外。
(7) 包紮
加塞後，將全部試管用麻繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道麻繩紮好。用記號筆註明培養基名稱、組別、配製日期。三角燒瓶加塞後，外包牛皮紙，用麻繩以活結形式紮好，使用時容易解開，同樣用記號筆註明培養基名稱、組別、配製日期。
(8) 滅菌
將上述培養基以0.103MPa，121℃，20min高壓蒸氣滅菌。
(9) 擱置斜面
將滅菌的試管培養基冷至50℃左右〔以防斜面上冷凝水太多〕，將試管口端捆在玻棒或其他合適高度的器具上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜 。
(10) 無菌撿查
將滅菌培養基放人37℃的溫室中培養24—48h，以檢查滅菌是否徹底。
2．高氏I號培養基配製方法
(1) 稱量和溶化
按配方先稱取可溶性澱粉、放入小燒杯中，並用少量冷水將澱粉調成糊狀，再加入少於所需水量的沸水中，繼續加熱，使可溶性澱粉完全溶化。然後再稱取其他各成分依次逐一溶化。對微量成分FeSO4•7H2O可先配成高濃度的貯備液按比例換算後再加入，方法是先在100mL水中加入1g的FeSO4•7H2O配成0.01g／ml，再在1000mL培養基中加1mL的0.0l g／m1的貯備液即可。待所有葯品完全溶解後，補充水分到所需的總體積。如要配製固體培養基，其溶化過程同牛肉膏蛋白腖培養基配製方法。
(2) pH調節、分裝、包紮、滅菌及無菌檢查同牛肉膏蛋白腖培養基配製方法。
3．馬鈴薯培養基配製方法
取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，放入1500mL的燒杯中煮沸30min，注意用玻棒攪拌以防糊底。然後用雙層紗布過濾，取濾液加糖（酵母菌用葡萄糖，黴菌用蔗糖），加熱煮沸後加入瓊脂，繼續加熱融化並補足失水。再按前所述，進行分裝、加塞、包紮、0.1MPa滅菌20 min。
4．察氏培養基配製方法
方法同牛肉膏蛋白腖培養基配製。
實驗結果及討論
針對實驗原理、步驟、現象進行討論。
實驗作業（選做3題）
1．牛肉膏應置於何種容器中稱量為宜?
2．配製高氏合成一號培養基時，可溶性澱粉需經什麼處理後才能倒入到沸水中?
3．何謂培養基的自然pH?
4．培養基配好後，為什麼必須立即滅菌?如何檢查滅菌後的培養基是無菌的
5．在配製培養基的操作過程中應注意些什麼問題?為什麼?
6．配製合成培養基加入微量元素時最好用什麼方法加入?天然培養基為什麼不需要另加微量元素?
7．有人認為自然環境中微生物是生長在不按比例的基質中，為什麼在配製培養基時要注意各種營養成分的比例?
8．你配製的高氏I號培養基有沉澱產生嗎?說明產生或未產生的原因。
9．細菌能在高氏I號培養基上生長嗎?為了分離放線菌，你認為應該採取什麼措施?

D. 培養固體培養基的時候需要加入水嗎還是只加瓊脂

必培養自生固氮菌不需要氮源 因為固氮菌能固定空氣中的氮素,對於生產用固體培養基是不需要加入瓊脂的,它可以為其他生物提供氮源 A的錯誤在於,比如平菇的生產培養基培養基配方為42%玉米芯+20%棉籽殼+20%木屑+10%麥麩+5%稻糠+3%豆餅粉

E. 微生物培養基配製的最基本原則

1、選擇適宜的營養物質

總體而言，所有微生物生長繁殖均需要培養基含有碳源、氮源、無機鹽、生長因子、水及能源，但由於微生物營養類型復雜，不同微生物對營養物質的需求是不一樣的，因此首先要根據不同微生物的營養需求配製針對性強的培養基。自養型微生物能從簡單的元機物合成自身需要的糖類、脂類、蛋白質、核酸、維生素等復雜的有機物，因此培養自養型微生物的培養基完全可以(或應該)由簡單的無機物組成。例如，培養化能自養型的氧化硫硫桿菌(Thiobacillus thiooxdans)的培養基組成見表3.9。在該培養基配製過程中並末專門加入其他碳源物質，而是依靠空氣中和溶於水中的CO2為氧化硫硫桿菌提供碳源。就微生物主要類型而言，有細菌、放線菌、酵母菌、黴菌、原生動物、藻類及病毒之分，培養它們所需的培養基各不相同。在實驗室中常用牛肉膏蛋白腖培養基(或簡稱普通肉湯培養基)培養細菌，用高氏I號合成培養基培養放線菌，培養酵母菌一般用麥芽汁培養基，培養黴菌則一般用查氏合成培養基。
2、營養物質濃度及配比合適

培養基中營養物質濃度合適時微生物才能生長良好，營養物質濃度過低時不能滿足微生物正常生長所需，濃度過高時則可能對微生物生長起抑製作用，例如高濃度糖類物質、無機鹽、重金屬離子等不僅不能維持和促進微生物的生長，反而起到抑菌或殺菌作用。另外，培養基中各營養物質之間的濃度配比也直接影響微生物的生長繁殖和(或)代謝產物的形成和積累，其中碳氮比(C/N)的影響較大。嚴格地講，碳氮比指培養基中碳元素與氮元素的物質的量比值，有時也指培養基中還原糖與粗蛋白之比。例如，在利用微生物發酵生產谷氨酸的過程中，培養基碳氮比為4/l時，菌體大量繁殖，谷氨酸積累少；當培養基碳氮比為3/l時，菌體繁殖受到抑制，谷氨酸產量則大量增加。再如，在抗
生素發酵生產過程中，可以通過控制培養基中速效氮(或碳)源與遲效氮(或碳)源之間的比例來控制菌體生長與抗生素的合成協調。
3、控制pH條件
培養基的pH必須控制在一定的范圍內，以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產生代謝產物。各類微生物生長繁殖或產生代謝產物的最適pH條件各不相同，一般來講，細菌與放線菌適於在pH7～7.5范圍內生長，酵母菌和黴菌通常在pH4.5～6范圍內生長。值得注意的是，在微生物生長繁殖和代謝過程中，由於營養物質被分解利用和代謝產物的形成與積累，會導致培養基pH發生變化，若不對培養基pH條件進行控制，往往導致微生物生長速度下降或(和)代謝產物產量下降。因此，為了維持培養基pH的相對恆定，通常在培養基中加入pH緩沖劑，常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽(如KH2PO4 和K2HPO4)組成的混合物。K2HPO4溶液呈鹼性，KH2PO4溶液呈酸性，兩種物質的等量混合溶液的pH為6.8。當培養基中酸性物質積累導致H+濃度增加時，H+與弱鹼性鹽結合形成弱酸性化合物，培養基pH不會過度降低；如果培養基中OH-濃度增加，OH-則與弱酸性鹽結合形成弱鹼性化合物，培養基pH也不會過度升高。但KH2PO4 和K2HPO4緩沖系統只能在一定的pH范圍(pH6.4～7.2)內起調節作用。有些微生物，如乳酸菌能大量產酸，上述緩沖系統就難以起到緩沖作用，此時可在培養基中添加難溶的碳酸鹽(如CaCO3)來進行調節，CaCO3難溶於水，不會使培養基pH過度升高，但它可以不斷中和微生物產生的酸，同時釋放出CO2，將培養基pH控制在一定范圍內。在培養基中還存在一些天然的緩沖系統，如氨基酸、肽、蛋白質都屬於兩性電解質，也可起到緩沖劑的作用。
4、控制氧化還原電位(redoxpotential)
不同類型微生物生長對氧化還原電位(F)的要求不一樣，一般好氧性微生物在F值為+0.1V以上時可正常生長，一般以+0.3一+0.4V為宜，厭氧性微生物只能在F值低於+0.1V條件下生長，兼性厭氧微生物在F值為+0.1V以上時進行好氧呼吸，在+0.1V以下時進行發酵。F值與氧分壓和pH有關，也受某些微生物代謝產物的影響。在pH相對穩定的條件下，可通過增加通氣量(如振盪培養、攪拌)提高培養基的氧分壓，或加入氧化劑，從而增加F值；在培養基中加入抗壞血酸、硫化氫、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇等還原性物質可降低F值。
5、原料來源的選擇
在配製培養基時應盡量利用廉價且易於獲得的原料作為培養基成分，特別是在發酵工業中，培養基用量很大，利用低成本的原料更體現出其經濟價值。例如，在微生物單細胞蛋白的工業生產過程中，常常利用糖蜜(製糖工業中含有蔗糖的廢液)、乳清(乳製品工業中含有乳糖的廢液)、豆製品工業廢液及黑廢液(造紙工業中含有戊糖和己糖的亞硫酸紙漿)等都可作為培養基的原料。再如，工業上的甲烷發酵主要利用廢水、廢渣作原料，而在我國農村，已推廣利用人畜糞便及禾草為原料發酵生產甲烷作為燃料。另外，大量的農副產品或製品，如鼓皮、米糠、玉米漿、酵母浸膏、酒糟、豆餅、花生餅、蛋白腖等都是常用的發酵工業原料。
6、滅菌處理
要獲得微生物純培養，必須避免雜菌污染，因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養基而言，更是要進行嚴格的滅菌。對培養基一般採取高壓蒸汽滅菌，一般培養基用1.05kg/cm2，121.3℃條件下維持15～30min可達到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過程中，長時間高溫會使某些不耐熱物質遭到破壞，如使糖類物質形成氨基糖、焦糖，因此含糖培養基常在0.56kg/ cm2，112.6℃15～30min進行滅菌，某些對糖類要求較高的培養基，可先將糖進行過濾除菌或間歇滅菌，再與其他已滅菌的成分混合；長時間高溫還會引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽離子(特別是鈣、鎂、鐵離子)結合形成難溶性復合物而產生沉澱，因此，在配製用於觀察和定量測定微生物生長狀況的合成培養基時，常需在培養基中加入少量螯合劑，避免培養基中產生沉澱，常用的螯合劑為乙二胺四乙酸(EDTA)。還可以將含鈣、鎂、鐵等離子的成分與磷酸鹽、碳酸鹽分別進行滅菌，然後再混合，避免形成沉澱；高壓蒸汽滅菌後，培養基pH會發生改變(一般使pH降低)，可根據所培養微生物的要求，在培養基滅菌前後加以調整。在配製培養基過程中，泡沫的存在對滅菌處理極不利，因為泡沫中的空氣形成隔熱層，使泡沫中微生物難以被殺死。因而有時需要在培養基中加入消泡沫劑以減少泡沫的產生

F. 配製培養基的基本步驟有哪些應注意什麼問題

按配方計算培養基中各種成分的用量→稱量，（一般動作要迅速一些，因為其中可能有些成分容易吸潮）→溶化（將稱好的各種成分溶解在水中，如果是固體培養基，需要使用凝固劑，如瓊脂等，熔化時，注意攪拌，防止糊底）→調pH→滅菌（高壓蒸汽滅菌）→倒平板

G. 配製培養基的步驟

培養基的配製：

1、配料：在容器中加入少量水，按照配方稱取各種葯品，加足所需水量（一葯一勺，取葯後立即蓋上瓶蓋）。

2、溶解：澱粉溶解：少量冷水調成糊狀，加熱溶解，特別是加有瓊脂的培養基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度95-97℃ ，且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。

3、調PH：用1N的鹽酸或1N的 NaOH把培養基調節到所要求的值。

4、過濾：濾紙或棉花進行過濾。

5、分裝：一般培養基放在三角瓶或試管中滅菌使用。

(1)三角瓶

若作靜置培養，則100ml培養基/250ml的三角瓶，最多不能超過150ml培養基/250ml的三角瓶，否則滅菌時培養基沸騰容易污染棉塞，造成染菌；若作搖瓶培養，則15-20ml培養基/250ml的三角瓶，保證通氣良好。

(2)試管分裝

液體培養基一般裝4-5ml，約試管的1/4高度。

固體斜面培養基一般裝3-4ml，約試管的1/5高度。

6、包紮：分裝好後，塞上棉塞，在用牛皮紙將棉塞包裹好，防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。

7、滅菌：按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高，營養成分會被破壞，培養基中的糖、氨基酸會使培養基的顏色變深。

8、擺斜面：滅菌後需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放，使其凝固成為一個斜面，約占試管長度的1/2。

9、貯存：培養基在30℃下放置一天，無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放於2-8℃冰箱中備用。

(7)培養基製作為什麼要補水擴展閱讀：

培養基，是指供給微生物、植物或動物生長繁殖的，由不同營養物質組合配製而成的營養基質。

一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽、維生素和水等幾大類物質。培養基既是提供細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質，也是細胞生長和繁殖的生存環境。

配置培養基注意問題：

1、 根據不同微生物的營養需要配製不同的培養基。

2、 注意各種營養物質的濃度及合適配比，保持合適滲透壓 。

3、 將培養基的 pH 控制在適宜的范圍之內，以利於不同類型微生物的生長繁殖或代謝產物的積累。

4、要注意各種原料的配比，每種培養基的配比合適的配比，可以按照老師的要求去做。

5、如需要加熱的時候注意時間的把握。

參考資料：網路—培養基

H. 母種培養基如何製作

上述7個培養基配方中，馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂培養基（PDA）應用最普遍，在此著重介紹PDA培養基的配製方法。
（1）配製選擇優質馬鈴薯，去皮，挖去發芽根，削去青皮切成薄片，稱取200克，置於鋼精鍋或鋁鍋，加水1000毫升，煮沸後小火保持30分，用4層紗布過濾，取其汁液（上述配方中麩皮、米糠、玉米粉、黃豆粉、木屑等用同法取其汁液）。若濾液不足1000毫升，加水補足。然後加入瓊脂繼續加熱，待瓊脂完全溶化後，再加入葡萄糖，補水至1000毫升，用玻璃棒攪拌均勻，趁熱分裝試管或三角瓶中備用。（2）分裝試管將配製好的PDA培養基，趁熱到入事先准備好的分裝器或漏斗、量杯，分裝試管。每支試管培養基為管長的1/5～1/4，培養基液不可黏附管口內壁，如有黏附物必須擦試干凈，以防雜菌感染。（3）塞棉塞棉塞要緊貼管壁，松緊度以用手指提起棉塞而不脫掉為宜，光圓不起皺，插入管口的長度為棉塞總長的2/3。然後將塞好棉塞的試管綁紮成捆，管口棉塞處用牛皮紙包紮好，以防滅菌時棉塞受潮，引起雜菌感染。（4）滅菌將包紮成捆的試管，放入手提式高壓滅菌鍋內，在0.15兆帕壓力下滅菌30分鍾。使用手提式高壓鍋時必須按要求進行操作，特別要注意加水和熄火這兩個技術環節，以防燒鍋、水浸試管和試管破裂、沖塞等人為事故。（5）排成斜面將取出的試管冷卻到50～60℃後，放到用木架或木條擺成一定角度的斜面上，使之凝成斜面，傾斜度以斜面達到管長的1/2為度。待完全凝固後，即成試管斜面培養基，供分離、培養母種用。（6）檢驗隨機抽取3～5支試管，置於25～30℃下培養3天左右進行培管查雜。若所查試管培養基表面或內部均無任何變化，則表面滅菌效果好，可供接種培養用；若個別試管的斜面上有雜菌菌落，說明滅菌不徹底，要重新滅菌。這種檢驗不是每次滅菌時都要進行，一般在新購滅菌鍋滅菌時或中途長時間未用和隨機抽驗時才進行這種檢驗的。

I. 制培養基時為什麼要再次用熱水定容

培養基一般都是先高壓滅菌，高溫會影響pH值……

J. 配製培養基的原則和方法是什麼

培養基有很多種，你要配製哪一種呢？

你要查清楚，你要配的培養基的成分有那些，然後把要用的東西找到。在配製之前你要把裝培養基的容器准備好，是用試管、平皿還是三角瓶。之後看要配的是固體培養基還是液體培養基，覺得是否放瓊脂或明膠。之後找來一個大燒杯，依次把要放的物質放入，要是配的是固體培養基要把加入瓊脂或明膠的培養基放在電爐上加熱，待瓊脂或明膠完全溶解後趁熱迅速分裝。之後把分裝好的培養基封口，之後選擇是干滅還是濕滅，等滅菌之後，配製培養基的工作就完成了。

培養基的配製與滅菌

1目的
1.1了解並掌握培養基的配製、分裝方法
1.2掌握各種實驗室滅菌方法及技術。
2原理
培養基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養料。由於微生物具有不同的營養類型，對營養物質的要求也各不相同，加之實驗和研究的目的不同，所以培養基的種類很多，使用的原料也各有差異，但從營養角度分析，培養基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無機鹽、生長素以及水分等。另外，培養基還應具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。
瓊脂是從石花菜等海藻中提取的膠體物質，是應用最廣的凝固劑。加瓊脂製成的培養基在98～100℃下融化，於45℃以下凝固。但多次反復融化，其凝固性降低。
任何一種培養基一經製成就應及時徹底滅菌，以備純培養用。一般培養基的滅菌採用高壓蒸汽滅菌。
3材料
3.1器皿及材料
天平、稱量紙、牛角匙、精密pH試紙、量筒、刻度搪瓷杯、試管、三角瓶、漏斗、分裝架、移液管及移液管筒、培養皿及培養皿盒、玻璃棒、燒杯、試管架、鐵絲筐、剪刀、酒精燈、棉花、線繩、牛皮紙或報紙、紗布、乳膠管、電爐、滅菌鍋、乾燥箱。
3.2葯品試劑
蛋白腖、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、瓊脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麥芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽計、磷酸銨、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。
4流程
稱葯品→溶解→調pH值→融化瓊脂→過濾分裝→包紮標記→滅菌→擺斜面或倒平板。
5步驟
5.1培養基的制備
5.1.1稱量葯品
根據培養基配方依次准確稱取各種葯品，放入適當大小的燒杯中，瓊脂不要加入。蛋白腖極易吸潮，故稱量時要迅速。
5.1.2溶解
用量筒取一定量(約占總量的1/2)蒸餾水倒入燒杯中，在放有石棉網的電爐上小火加熱，並用玻棒攪拌，以防液體溢出。待各種葯品完全溶解後，停止加熱，補足水分。如果配方中有澱粉，則先將澱粉用少量冷水調成糊狀，並在火上加熱攪拌，然後加足水分及其它原料，待完全溶化後，補足水分。
5.1.3調節pH
根據培養基對pH的要求，用5%NaOH或5%HC1溶液調至所需pH。測定pH可用pH試紙或酸度計等。
5.1.4溶化瓊脂
固體或半固體培養基須加入一定量瓊脂。瓊脂加入後，置電爐上一面攪拌一面加熱，直至瓊脂完全融化後才能停止攪拌，並補足水分(水需預熱)。注意控制火力不要使培養基溢出或燒焦。
5.1.5過濾分裝
先將過濾裝置安裝好（圖3-1）。如果是液體培養基，玻璃漏斗中放一層濾紙，如果是固體或半固體培養基，則需在漏斗中放多層紗布，或兩層紗布夾一層薄薄的脫脂棉趁熱進行過濾。過濾後立即進行分裝。分裝時注意不要使培養基沾染在管口或瓶口，以免浸濕棉塞， 引起污染。液體分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。固體分裝裝量為管高的1/5，半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜；分裝三角瓶，其裝量以不超過三角瓶容積的一半為宜。
5.1.6包紮標記
培養基分裝後加好棉塞或試管帽，再包上一層防潮紙，用棉繩系好。在包裝紙上標明培養基名稱，制備組別和姓名、日期等。
5.1.7滅菌
上述培養基應按培養基配方中規定的條件及時進行滅菌。普通培養基為121℃20min，以保證滅菌效果和不損傷培養基的有效成份。培養基經滅菌後，如需要作斜面固體培養基，則滅菌後立即擺放成斜面(圖3-2)，斜面長度一般以不超過試管長度的1/2為宜；半固體培養基滅菌後，垂直冷凝成半固體深層瓊脂。
5.1.8倒平板
將需倒平板的培養基，於水浴鍋中冷卻到45～50℃,立刻倒平板。
5.2滅菌方法
滅菌是指殺死或消滅一定環境中的所有微生物，滅菌的方法分物理和化學滅菌法兩大類。本實驗主要介紹物理方法的一種，即加熱滅菌。
加熱滅菌包括濕熱和乾熱滅菌兩種。通過加熱使菌體內蛋白質凝固變性，從而達到殺菌目的。蛋白質的凝固變性與其自身含水量有關，含水量越高，其凝固所需要的溫度越低。在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比乾熱大，因為在濕熱情況下，菌體吸收水分，使蛋白質易於凝固；同時濕熱的穿透力強，可增加滅菌效力。
5.2.1.高壓蒸汽滅菌法
高壓蒸汽滅菌用途廣，效率高，是微生物學實驗中最常用的滅菌方法。這種滅菌方法是基於水的沸點隨著蒸汽壓力的升高而升高的原理設計的。當蒸汽壓力達到1.05kg/cm2時，水蒸氣的溫度升高到121℃，經15～30min，可全部殺死鍋內物品上的各種微生物和它們的孢子或芽孢。一般培養基、玻璃器皿以及傳染性標本和工作服等都可應用此法滅菌（圖3-4）。
5.2.1.1操作方法和注意事項如下
加水
打開滅菌鍋蓋，向鍋內加水到水位線。立式消毒鍋最好用已煮開過的水，以便減少水垢在鍋內的積存。注意水要加夠，防止滅菌過程中干鍋。
裝料、加蓋
滅菌材料放好後，關閉滅菌器蓋，採用對角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋，使蒸汽鍋密閉，勿使漏氣。
排氣

打開排氣口(也叫放氣閥)。用電爐加熱，待水煮沸後，水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出，當有大量蒸汽排出時，維持5min，使鍋內冷空氣完全排凈。
升壓、保壓和降壓
當鍋內冷空氣排凈時，即可關閉排氣閥，壓力開始上升。當壓力上升至所需壓力時，控制電壓以維持恆溫，並開始計算滅菌時間，待時間達到要求（一般培養基和器皿滅菌控制在121℃，20min）後，停止加熱，待壓力降至接近「0」時，打開放氣閥。注意不能過早過急地排氣，否則會由於瓶內壓力下降的速度比鍋內慢而造成瓶內液體沖出容器之外。
滅菌後的培養基空白培養
滅菌後的培養基放於37℃培養箱中培養，經24h培養無菌生長，可保存備用；斜面培養基取出後，立即擺成斜面後空白培養；半固體的培養基垂直放置凝成半固體深層瓊脂後，空白培養。
5.2.2乾熱滅菌法
通過使用乾熱空氣殺滅微生物的方法叫乾熱滅菌。一般是把待滅菌的物品包裝就緒後，放入電烘箱中烘烤，即加熱至160～170℃維持1～2h。
乾熱滅菌法常用於空玻璃器皿、金屬器具的滅菌。凡帶有膠皮的物品，液體及固體培養基等都不能用此法滅菌。
5.2.2.1滅菌前的准備
玻璃器皿等在滅菌前必須經正確包裹和加塞，以保證玻璃器皿於滅菌後不被外界雜菌所污染。常用玻璃器皿的包紮和加塞方法如下：平皿用紙包紮或裝在金屬平皿筒內；三角瓶在棉塞與瓶口外再包以厚紙，用棉繩以活結扎緊，以防滅菌後瓶口被外部雜菌所污染；吸管以拉直的曲別針一端放在棉花的中心，輕輕捅入管口，松緊必須適中，管口外露的棉花纖維統一通過火焰燒去，滅菌時將吸管裝入金屬管筒內進行滅菌，也可用紙條斜著從吸管尖端包起，逐步向上卷，頭端的紙卷捏扁並擰幾下，再將包好的吸管集中滅菌。
5.2.2.2乾燥箱滅菌
將包紮好的物品放入乾燥烘箱內，注意不要擺放太密，以免妨礙空氣流通；不得使器皿與烘箱的內層底板直接接觸。將烘箱的溫度升至160～170℃並恆溫1～2h，注意勿使溫度過高，超過170℃，器皿外包裹的紙張、棉花會被烤焦燃燒。如果是為了烤乾玻璃器皿，溫度為120℃持續30分鍾即可。溫度降至60～70℃時方可打開箱門，取出物品，否則玻璃器皿會因驟冷而爆裂。
用此法滅菌時，絕不能用油、蠟紙包紮物品。
5.2.2.3火焰滅菌
直接用火焰灼燒滅菌，迅速徹底。對於接種環，接種針或其它金屬用具，可直接在酒精燈火焰上燒至紅熱進行滅菌。此外，在接種過程中，試管或三角瓶口，也採用通過火焰而達到滅菌的目的。
6結果
6.1記錄各種不同物品所用的滅菌方法及滅菌條件（溫度、壓力等）。
6.2試述高壓蒸汽滅菌的過程及注意事項。
7思考
7.1制備培養基的一般程序是什麼？
7.2做過本次實驗後，你認為在制備培養基時要注意些什麼問題？
7.3滅菌在微生物學實驗操作中有何重要意義？
4試述高壓蒸汽滅菌的操作方法和原理。
5高壓蒸汽滅菌時應注意哪些事項？